Nombre de la línea: [K]iPS4F-8
Origen: Biopsia de queratinocitos humanos procedentes de epidermis de prepucio

Datos relativos a la muestra biológica:
Donación: 26.04.2008
Recepción en el Banco de Líneas Celulares del CMR[B]: 27.04.2008

Descripción general del proceso utilizado:

Se recoge la biopsia de prepucio en medio para keratinocitos libre de suero y bajo en calcio (Epilife, Invitrogen) que contiene tres tipos de antibióticos (100U/mL pen-strept. y 10 g/mL amf. Se coloca la biopsia en una placa (10 mm), se corta en varios trozos y se incuba 12-18h a 4ºC en dispasa diluida en medio de keratinocitos para separar la dermis de la epidermis. Se separa la epidermis de la dermis con la ayuda de unas pinzas. Se incuba 1º min a 37ºC en tripsina al 0, 25%. Se añade medio de keratinocitos fresco y se lava a 1200 rpm 5 min. Se resuspende el pellet y se cultiva en medio Epilife (libre de suero y con una concentración baja de calcio) en placas cubiertas con colágeno tipo I. Bajo estas condiciones solo crecen los keratinocitos keratina-positivos. Tras la adición de niveles fisiológicos de calcio se diferencian y forman una epidermis estratificada totalmente diferenciada.
Se clonan los factores OCT4, SOX2, KLF4, c-Myc y GFP en un retrovirus que favorece la activación transcripcional. Tras dos rondas de infección, se tripsinizan las células en día 4 y se siembran en una monocapa irradiada de fibroblastos de ratón (MEFs) en medio hES. A los 2-3 días se detecta el crecimiento de pequeñas colonias que crecen rápidamente y a los 10 días post-infección presentan morfología similar a la de las células madre embrionarias
Los pases se siguientes se realizan mecánicamente sobre fibroblastos de prepucio humanos (HFF-1).

Soporte celular y medio de cultivo utilizados para la derivación:
Soporte celular: human foreskin fibroblasts (ATCC, American Type Culture Collection, CCD1112Sk).
Medio de cultivo: Knockout Dulbecco’s modified Eagle’s medium supplemented with 2 mmol/l
GlutaMAX (Gibco, InVitrogen corporation), 0,05mmol/l 2-mercaptoethanol (Gibco, InVitrogen corporation), 8 ng/ml basic fibroblast growth factor (bFGF) (Invitrogen), 1% non-essential amino acids (Cambrex), 20% Knockout Serum Replacement (InVitrogen) y 0,5% Penicillin-Streptomycin (Gibco, InVitrogen corporation).

Caracterización [K]iPS4F-8

Cariotipo[K]iPS4F-8

Documentación en formato PDF

[K]iPS4F-8